Tリンパ球の免疫フェノタイピング: ガイド

Tリンパ球は免疫系において重要な役割を果たす白血球の一種です。 T細胞には多くの種類があり、その機能を研究するためには正確に区別できることが重要である。 免疫フェノタイピングは、これらの異なるタイプのTリンパ球を識別して分類するプロセスです。 このガイドでは、T細胞の識別に使用されるさまざまなマーカーとフローサイトメトリーを使用してそれらをソートする方法について説明します。 また、さまざまなヘルパーT細胞サブセットとその活性化マーカーについても見ていきます。 免疫フェノタイピングの基礎を理解することで、免疫関連疾患を効果的に診断·治療することができます。

T細胞は大きく二つのタイプに分けられる:ヘルパーT細胞と細胞毒性T細胞。 ヘルパーT細胞は、他の免疫細胞を活性化するのに役立ち、細胞毒性T細胞は感染または癌細胞を殺す。 T細胞サブセットは、表面上の様々な活性化マーカーの発現によって区別される。

ヘルパー T セルには、主に 3 つのタイプがあります: Th0、Th17、および調節性 T（Treg）細胞。 これらのサブセットはそれぞれ免疫系で異なる機能を持っています。

• Th0細胞はヘルパーT細胞の一種であり、まだ完全に活性化されていない。 活性化マーカーCD25の発現と転写因子T-betによって区別される。
• Th17細胞はヘルパーT細胞の一種で、サイトカインIL-17を分泌する役割を担っています。 これらは活性化マーカーCD154、IL-17およびRORγtの発現によって区別される。
• 調節T細胞は、免疫応答を調節するのに役立つヘルパーT細胞の一種です。 これらは活性化マーカーFoxp3の発現によって区別される。

細胞毒性T細胞は、感染または癌細胞を殺す役割をするT細胞の一種です。 活性化マーカーCD8の発現によって区別される。 細胞傷害性T細胞はさらに2つのタイプに分けられる:

• CD56dim細胞毒性T細胞は、まだ完全に活性化されていない細胞毒性T細胞の一種である。 これらは、活性化マーカーCD16の発現と転写因子EOMSによって区別される。
• CD56明るい細胞傷害性T細胞は、すでに完全に活性化されている細胞傷害性T細胞の一種です。 活性化マーカーCD16の発現によって区別される。

最も一般的に使用される免疫原性T細胞マーカーはCD45、CD25、およびCD69である。 これらのマーカーは、特定の機能に関係なく、すべての活性化されたT細胞に発現します。 他の活性化マーカーとしては、CD154（CD40リガンド）、CD40およびHLA-DRがある。 これらの抗体は、活性化されたT細胞と非活性化されたT細胞を区別するだけでなく、ヘルパーT細胞の異なるサブタイプを区別するために使用できます。 フローサイトメトリーはヘルパーT細胞の機能状態を決定するためにも使用できます。 活性化マーカーHLA-DRの発現は、これらの細胞における活性化レベルを評価するためにしばしば使用される。 HLA-DR発現のレベルを測定することにより、ヘルパーT細胞がどれだけ活性であるかをより正確に把握できます。

フローサイトメトリー（Flow cytometry）は、試料中の異なる種類の細胞を識別し定量化するために使用される技術である。 液体の流れに試料を注入することで機能し、これにより細胞がレーザーを通り抜ける。 その後、レーザーは細胞表面のさまざまなマーカーの発現を検出するために使用されます。

フローサイトメトリーは、T細胞の分類と分類に最も一般的に使用される方法です。 この技術は、レーザーを使って細胞表面の特定の抗原に結合した蛍光染料を励起する。 その後、検出器によって蛍光を検出し、コンピュータによってデータを解析する。 これにより、抗原発現プロファイルに基づいて個々の細胞を識別し分類することができる。

フローサイトメトリーを使用してT細胞が識別されると、それらは特定の活性化マーカーの発現に基づいて異なるサブセットに分類される。 これは、蛍光活性化セルソーター（FACS）と呼ばれるデバイスを使用して行うことができます。 この方法は、蛍光標識抗体を使用してTh17、調節性（Treg）または細胞毒性T細胞を特異的に分離する。 FACSは、サイズと色に応じて細胞を分離し、各T細胞サブセットの純粋な母集団の収集を可能にする。 別の一般的な方法は、特定の活性化マーカーに対して抗体がコーティングされた磁気ビーズを使用することです。 これらのビーズは、活性化されたT細胞を非活性化されたT細胞から分離するために使用することができ、またはヘルパーT細胞を細胞毒性のT細胞から分離するために使用することができます。

T細胞の主な機能の一つは、感染から身体を守ることです。 T細胞が正常に機能しないと、体は感染などの病気にかかりやすくなります。 これはT細胞免疫不全として知られています。 T細胞にはさまざまな種類の異常があり、それぞれが異なる遺伝子の欠陥によって引き起こされます。 一般的な例としては、次のものがあります:

• 重症複合免疫不全症（SCID）は、体液性免疫システムと細胞性免疫システムの両方に影響を与える疾患である。 IL-12受容体ベータ鎖遺伝子の欠陥によって引き起こされる。
• DiGeorge症候群（DGS）は、胸腺や免疫系の他の部分に影響を与える疾患です。 それはTBX21遺伝子の欠陥によって引き起こされます。
• ウィスコット·アルドリッチ症候群（WAS）は、体液性免疫システムと細胞性免疫システムの両方に影響を与える疾患である。 WASタンパク質遺伝子の欠陥が原因です。
• 慢性肉芽腫性疾患（CGD）は、免疫系の食細胞に影響を与える疾患である。 それは、NADPHオキシダーゼ酵素の欠陥によって引き起こされます。

T セルのソートにより、その機能とアクティベーション状態をより詳細に分析できます。 T細胞はサイトカイン、成長因子、抗原など多様な刺激によって活性化することができる。 いったん活性化されると、サイトカインを分泌し、免疫反応を調節するのに役立ちます。 欠陥のあるT細胞の特定活性化マーカーを識別することで、医師は障害の原因についてよりよく理解し、特定の欠陥を対象とした治療計画を作成することができます。 したがって、免疫フェノタイピングは研究目的だけでなく、自己免疫疾患の診断と治療にも有用です。

• Human IL-2R alpha / CD25 ELISA Kit
• Human NCAM-1 / CD56 ELISA Kit
• Human CD45 / LCA ELISA Kit