ヒトサイトカインマルチプレックスアッセイは、サイズと蛍光強度によって分けられた複数のビーズ集団を利用します。各ビーズサイズに複数サイズのビーズと複数レベルの蛍光強度を用い、GeniePlex技術によりわずか15μLのサンプル量のみで24検体を同時に測定可能です。

ビーズ集団は、シングル488nmレーザー光もしくは488nmと633/640nmのデュアルレーザー光を装備したフローサイトメーターにより測定されます。ビーズ判別用の最大蛍光波長は700nmです。

ビーズベースのイムノアッセイはサンドイッチELISAの原理に似ています。ビーズ上に結合している捕捉抗体が、サイトカインのようなサンプル中の対象タンパク質を捕捉します。捕捉された因子は、タンパク質の別エピトープを認識するビオチン標識抗体によって挟まれ、ストレプトアビジン-フィコエリスリンと反応させます。そして、ビーズ上のフィコエリスリンの蛍光強度をフローサイトメーターによって数値化します。

サンプル中の測定対象タンパク質の濃度は、濃度既知の因子を連続希釈して得られる標準曲線中から、蛍光シグナルを比較することにより得られます。

アッセイ手順は、抗原とビーズ上の捕捉抗体を結合させるインキュベーションステップ（60分間）と、ビオチン標識抗体を結合させるインキュベーションステップ（30分間）、ストレプトアビジンPEを反応させるインキュベーションステップ（20分間）からなります。

図1. 手順の概要:

1.) Genieplex抗体標識ビーズをウェルに添加する。2.) サンプルとスタンダードをウェルに添加する。室温で60分間、サンプルをインキュベートする。続いて、フィルタープレート吸引システムを使用し、プレートを3回洗浄する。3.) ビオチン標識抗体を加え、30分間インキュベートする。続いて、フィルタープレート吸引システムを使用し、プレートを3回洗浄する。4.) ストレプトアビジンPE溶液を加え、20分間インキュベートする。続いて、フィルタープレート吸引システムを使用し、プレートを3回洗浄する。5.) リーディングバッファー液を加え、フローサイトメーターでサンプルを測定する。6.) データを解析する。