コントロールをロードするための抗体

ローディングコントロールは、細胞内で遍在的に発現するタンパク質です。 その濃度はめったに変化せず、特定の細胞型で豊富に発現するタンパク質であることがよくあります。 ローディングコントロールは、ウエスタンブロッティング実験の内部標準として使用されます。 ウエスタンブロットは、サンプル中のタンパク質がサイズに基づいてゲル上で電気泳動的に分離されることを前提として機能します。 次に、これらをニトロセルロースメンブレンなどの固体表面に転写し、標的タンパク質の濃度を測定できる一次抗体と二次抗体で処理します。 ローディングコントロールは、サンプル中のタンパク質の濃度を計算するために使用されます。 標的タンパク質濃度がローディングコントロールタンパク質濃度と比較されるため、結果の正規化を可能にするのはローディングコントロール抗体の使用です。

ヒューマンエラー（ウェルに添加されたタンパク質の量が不均一）によって引き起こされる可能性のある実験の失敗は、ほぼ即座に区別できます。 これにより、不正確または不確定な結果を処理するために無駄な時間がなくなるため、効率が向上し、実験時間が短縮されます。

ローディングコントロールは、サンプルだけでなく、メンブレンを通過するゲルも移動したかどうかを確認するために使用されます。 これは、ウエスタンブロットに関連するもう1つの一般的な問題です。

ローディングコントロールを使用すると、「エッジ効果」を修正することもできます。 これは、ゲルの側面のウェルに追加されたタンパク質が中央に向かってドリフトするときです。 ローディングコントロールは、これを確立して制御できます。

使用される一般的なローディングコントロールは、ハウスキーピング遺伝子タンパク質またはすべての細胞タイプにわたって構成的に発現される他のタンパク質である可能性があります。 ローディングコントロールは、ほとんどの実験条件下で高度に保存され、高度に発現され、安定しているタンパク質です。 発現は、生物学的または実験的変動によってめったに影響を受けません。

ほとんどの条件下では、ローディングコントロールタンパク質の発現は変化しませんが、いくつかの例外があります。 これらには以下が含まれます:

• ローディングコントロールタンパク質は、組織の種類によって発現が異なる場合があります（骨格筋と体の他の場所でのベータアクチンの発現が高い）。
  ローディングコントロールタンパク質は、さまざまな病状（例：癌）で発現が異なる場合があります。
  ローディングコントロールタンパク質は、サンプルを採取した被験者の年齢に応じて発現が異なる場合があります。
  選択したローディングコントロールは、研究者がウエスタンブロットを実行するときにバンドを区別できるように、目的のタンパク質とは異なる分子量を持っている必要があります。

ローディングコントロール抗体は、目的のローディングコントロールタンパク質に対して反応性を持つ抗体です。 それらは、ハウスキーピング遺伝子タンパク質の定量化の役割で効果的であるために非常に特異的でなければなりません。 このようにして、結果として、サンプル内の目的のタンパク質の相対的な定量化が可能になります。