ノックアウト抗体

KO検証は、ノックアウト（KO）細胞株で抗体をテストすることによって抗体の特異性を確認する手段です。

KO細胞株（正確な標的タンパク質の発現があるか、発現が少ない細胞）を使用することは、抗体の特異性を検証するための新しいゴールドスタンダードです。

KO細胞株からシグナルが検出された場合、抗体は十分に特異的ではありません。 これは、抗体がサンプル内の同様のタンパク質に結合するためです。 一方、特異性の高い抗体はシグナルを生成しません。

KOで検証された抗体は、特異的、選択的、再現性があることを示す必要があります。

抗体は、最も一般的に使用される研究ツールの1つです。 これらのタンパク質は、ウエスタンブロット、ELISA、免疫染色（免疫組織化学（IHC）および免疫細胞化学（ICC））、免疫蛍光抗体法、フローサイトメトリーなどの実験で日常的に使用されています。

これらの実験手法の発見が信頼できるものであるためには、それらは内部的に高い基準の精度と精度を持たなければなりません。 これが、結果の再現性を保証できる特異性の高い抗体が必要な理由です。

sgRNA / CAS9を使用して標的細胞のゲノムDNAにフレームシフト変異を導入することにより、数百のCRISPRノックアウト細胞株を作成しました。

CRISPRノックアウト細胞を溶解し、野生型（WT）細胞をコントロールとして使用してウエスタンブロッティングを行いました。

次に、ウエスタンブロットをプレミアム抗体を使用してプローブしました。 タンパク質発現の低下の視覚化は、特異性の高い抗体（ノックアウト検証済み抗体）を示していました。

ダイアグラム: CRISPRテクノロジーを使用してKO検証済み抗体がどのように作成されるかの概略図。